探針法肺炎支原體實(shí)時定量PCR試劑盒

探針法肺炎支原體實(shí)時定量pcr試劑盒
probe-quantitative real-time pcr kit for mycoplasma pneumoniae
貨號：mqt-pne-20 規(guī)格：20個反應(yīng)
貨號：mqt-pne-50 規(guī)格：50個反應(yīng)
貨號：mqt-pne-100 規(guī)格：100個反應(yīng)
儲存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。
試劑盒特點(diǎn)：
特異性檢測肺炎支原體，與其他生物基因組沒有交叉反應(yīng)。 靈敏度高，most低檢測極限低于每反應(yīng)10個基因組。 使用的dna聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。 帶有陽性對照樣品（組分c），可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。 帶有dutp和udg酶，可降低殘留dna的污染。
肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae）屬于最小的自我復(fù)制型生物之一，是導(dǎo)致支原體肺炎的人類病原體。其細(xì)胞呈細(xì)長形狀，長約1-2μm，寬約0.1-0.2μm，光學(xué)顯微鏡下無法檢測；其菌落的長度通常小于100μm，需要立體顯微鏡來觀察。肺炎支原體寄生于人類的呼吸道上皮，通過附著細(xì)胞器粘附于呼吸上皮細(xì)胞，然后與宿主細(xì)胞融合并進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，逃避宿主免疫系統(tǒng)的檢測，并調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的組成以模擬宿主細(xì)胞膜。因此肺炎支原體易于產(chǎn)生慢性或潛伏性感染，而且因其細(xì)胞膜組成與人細(xì)胞相似，可能導(dǎo)致幾種器官和組織中的自身免疫反應(yīng)。
肺炎支原體分布遍及全球，可引起多種癥狀，包括：肺炎、支氣管炎、上呼吸道疾病，有時并不表現(xiàn)出癥狀，通常與其他細(xì)菌或病毒難以區(qū)分。肺炎支原體經(jīng)常在患呼吸道疾病的病人中被發(fā)現(xiàn)，并且還與多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、中風(fēng)、傳染性神經(jīng)元炎、冠狀動脈疾病等有關(guān)。肺炎支原體是肺炎的重要致病因子，在大眾群體中占所有獲得性肺炎病例的10-30%，在封閉性群體（如住宿的學(xué)生、軍人）中則占25-71%。
肺炎支原體體外培養(yǎng)時生長緩慢，有時需數(shù)周的時間，因此很少使用體外培養(yǎng)法檢測。其他可能的檢測方法包括：免疫印跡，免疫熒光染色，血細(xì)胞吸附試驗(yàn)，四唑還原，代謝抑制試驗(yàn)，血清學(xué)試驗(yàn)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（pcr）等。由于成本低，測試時間相對較短，eia血清學(xué)分析是最常用的肺炎支原體檢測方法，其缺點(diǎn)在于需要使用活組織，這種取樣方式可能會加大感染的嚴(yán)重程度。血清學(xué)方法通常特異性和靈敏度都比較低，且只能做回顧性檢測。pcr是確定肺炎支原體存在的最快速和最有效的方法，有更高的靈敏度和更強(qiáng)的特異性，且檢測時間短，僅需幾個小時即可獲得結(jié)果。定量pcr法與常規(guī)pcr法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。
本試劑盒選擇核細(xì)胞黏附素基因作為靶點(diǎn)，特異性識別肺炎支原體，經(jīng)blast驗(yàn)證，與其他生物基因組沒有交叉反應(yīng)。本試劑盒檢測了分布范圍類似的28種細(xì)菌和6種病毒，未發(fā)現(xiàn)非特異信號；對49個組織樣品dna進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)38個陽性，與常規(guī)pcr方法檢測結(jié)果一致。
本試劑盒包含熱啟動dna聚合酶、dntp（以dutp代替dttp）、引物、探針、陽性對照品、rox染料，和用以防止殘余dna污染的udg（uracil-dnaglycosylase，尿嘧啶-dna-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好dna樣品即可使用。
本試劑盒采用的dna聚合酶源自極端嗜熱菌（thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下dna聚合酶活性被抑制。在pcr循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時dna聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動”功能。熱啟動可減少殘余dna的污染，提高pcr擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。
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